作者：丁建光，姜德咏，吴荣瀚，唐朝珍，李文生【摘要】  目的  探讨正常兔双眼ERG有无差异，建立兔视网膜缺血-再灌注的血管结扎模型。方法  20只兔，双眼均行ERG测定后随机分成A、B两组，A组兔10只，均右眼暴露视神经后不结扎。B组兔10只，均左眼视神经结扎60min。分别测定再灌注0h，3h，24h，48h，168h ERG a、b波振幅(aA、bA)值。结果  (1)正常兔左、右眼ERG aA、bA值差异无显著性，但个体之间存在一定差异。(2)未结扎组视网膜缺血-再灌注0h，3h，24h，48h，168h的ERG aA、bA值差异无显著性。(3)结扎后兔ERG aA、bA值均明显下降，再灌注24h最低，后逐渐上升。结论  (1)正常兔双眼ERG差异无显著性，但不同个体间有较大差异。(2)成功地建立了兔视网膜缺血-再灌注的血管结扎模型，发现缺血60min，再灌注24h时视网膜功能受到进一步损伤。    【关键词】  视网膜  缺血-再灌注损伤  视网膜电图  兔    Comparison of ERG in both normal eyes and establishment of experimental retinal ischemia-reperfusion injury model in rabbits    【Abstract】  Objective  To compare electroretinogram(ERG)in both normal eyes and establish a retinal ischemia-reperfusion injury model in rabbits.Methods  20 healthy rabbits were randomly divided into two groups(A，B)after ERG of both eyes.The retinal ischemia in the left eye of 10 rabbits in group B was induced by temporary ligation of the optic nerve for 60min，and a sham procedure was performed on the right eye of 10 rabbits in group A.The amplitudes of a，b-wave of(aA，bA)ERG were recorded at 0，3，24，48，168h of reperfusion.Results  (1)No significant difference was found in aA，bA of ERG between left and right eye in normal rabbits，but difference existed in individuals.(2)No significant difference was found in aA，bA of ERG at 0，3，24，48，168h of reperfusion in rabbits served as a non-ischemia control.(3)Both aA and bA were significantly decreased after a ligation.The aA，bA of ERG were decreased to the bottom at 24h of reperfusion，then gradually increased in the following time.Conclusion  (1)No significant difference is found in ERG between left and right eye in normal rabbits，but difference exists in individuals.(2)A retinal is chemia-reperfusion injury model in rabbits is established successfully.The retinal function aggravated is found at 24h of reperfusion after 60min ischemia.    【Key words】  retina  ischemia-reperfusion injury  electroretinogram  rabbit    视网膜缺血-再灌注损伤是目前研究的一个热点，由于视网膜缺血-再灌注损伤的机制较为复杂，因此，通过建立视网膜缺血-再灌注损伤模型，研究其发生机制以及预防和治疗方法是目前最行之有效的手段。目前，国外常用的视网膜缺血-再灌注损伤模型有血管结扎模型和升高眼内压模型［1～4］，本研究以视网膜电图(ERG)为指标，探讨了正常兔眼ERG以及结扎兔视神经建立视网膜缺血-再灌注损伤模型的可行性。    1  材料与方法    1.1  实验动物及分组  中南大学湘雅二医院实验动物中心提供的新西兰大白兔20只，体健无眼疾，体重1.8～2.5kg，雌雄不限，双眼均行ERG测定后随机分成A、B两组，A组兔10只，均右眼暴露视神经后不结扎；B组兔10只，均结扎左眼视神经60min。    1.2  正常兔眼视网膜电图的测定  检查前，用脱毛剂脱去兔额正中部体毛，用1%阿托品和10%新福林眼药水交替点眼3次，使其瞳孔充分放大，暗适应40min，自兔耳缘静脉注射3%戊巴妥钠溶液(1ml/kg)麻醉，实验眼充分开睑，置于全视野刺激球内中央处正前方，小心遮盖对侧眼，避免一切光刺激，兔眼滴0.5%丁卡因眼药水表麻后，将角膜接触电极放置于角膜表面，参考电极与接地电极分别固定于额正中、耳缘皮肤表面。电生理诊断仪参数：刺激光闪光强度为13.7cd·m-2·s，闪光间隔为2″，检测b波通频带为0.1～75Hz，记录波形放大5倍，结果由计算机自动处理分析并打印，记录a、b波振幅(aA、bA)值，检查结束后结膜囊内滴0.3%氟哌酸眼药水。    1.3  兔视网膜缺血-再灌注损伤模型的制作  麻醉后将兔固定于操作台上，剪除眼睑附近的毛发，结膜囊内滴入0.5%丁卡因眼药水，0.3%氟哌酸眼药水冲洗结膜囊，用经戊二醛器械消毒液浸泡消毒的眼科剪剪开外眦部皮肤至眶缘软骨，沿角膜缘360°剪开球结膜，钝性分离暴露4条直肌，做直肌牵引吊线，自颞上方向眼球后钝性分离，暴露视神经，小心地钝性分离视神经周围的包膜，充分暴露视神经，在眼球后约1.5mm处用0号黑丝线结扎视神经。用直接检眼镜观察眼底，见后极部视盘周围视网膜变白，动脉变细，静脉扩张，血管搏动消失。60min后松开结扎线，10min后用直接检眼镜观察眼底，见后极部视网膜恢复红色，动、静脉管径趋于正常。ERG测定结束后，用5/0丝线缝合球结膜，用3/0丝线缝合外眦部皮肤伤口，结膜囊内滴0.3%氟哌酸眼药水，涂0.5%四环素眼膏，送回兔笼饲养。    1.4  兔视网膜缺血-再灌注期间ERG的测定  兔眼手术后，立即行暗适应30～40min，1%阿托品和10%新福林眼药水交替点眼3次，测定ERG(即再灌注0h)，检查结束结膜囊内滴0.3%氟哌酸眼药水。再灌注3h，24h，48h，168h ERG测定时，麻醉，散瞳，暗适应同前。    1.5  统计学方法  所有数据均用均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS for Windows 10.0统计软件包处理，P＜0.05为差异有显著性。    2  结果    2.1  正常兔左、右眼ERG的比较  正常兔左、右眼ERG的aA、bA值未见统计学差异，但个体间差异较大，可以由aA、bA值的最大值、最小值和极差反映出来，见表1。    表1  正常兔左、右眼ERG的aA、bA值  (μV，n=20)    注：aA左眼vs右眼，P＝0.198；bA左眼vs右眼，P＝0.063    2.2  兔视网膜缺血-再灌注不同时间ERG的恢复情况  未结扎组各时间段ERG的aA、bA值均无下降，表明手术操作对ERG无影响。结扎60min组aA、bA值在再灌注0h、3h时差异无显著性，24h时aA、bA值均下降，48h又上升，且高于3h水平，168h高于48h水平，见表2。     表2  兔视网膜缺血-再灌注ERG aA、bA值的恢复情况  (x±s，%，n＝10)    注：与同