作者：刘培勋，周则卫，徐文清，刘晓秋，刘正明，李松年   【摘要】  目的  使用SMMC-7721肝癌细胞株对SPRIDA-A、SPRIDA-B和SPRIDA-A+SPRIDA-B体外抑制肿瘤生长和粘附功能进行研究。方法  采用MTT比色分析法观察SPRIDA-A、SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B对SMMC-7721肝癌细胞生长和粘附功能的影响，测定其生长抑制率和粘附抑制率。结果  SPRIDA-A对SMMC-7721肝癌细胞生长抑制作用不明显，SPRIDA-B和SPRIDA-A+SPRIDA-B对肝癌细胞生长有明显抑制作用，并呈剂量依赖关系；SPRIDA-B对SMMC-7721肝癌细胞粘附功能有明显抑制作用，并呈剂量依赖关系。SPRIDA-B作用于SMMC-7721肝癌细胞后，可见明显的凋亡细胞形态出现。结论  SPRIDA-B对SMMC-7721肝癌细胞生长和粘附功能有明显抑制作用，并可诱导细胞凋亡，是一个极具研究价值的抗肿瘤及抗转移的新药。        【关键词】  SPRIDA-A；SPRIDA-B；肝癌细胞；转移；粘附；凋亡        Effects of SPRIDA on growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721        【Abstract】  Objective  Study on  SPRIDA-A，SPRIDA-B and SPRIDA-A+SPRIDA-B inhibit growth and adhesion of tumor in vitro by using hepatoma cell line SMMC-7721.Methods  MTT was used to investigate the effect of SPRIDA-A，SPRIDA-B，SPRIDA-A+SPRIDA-B on growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721，and detect the inhibition rate of growth and adhesion.Results  SPRIDA-A could not obviously inhibit the growth of hepatoma cell SMMC-7721，SPRIDA-B and SPRIDA-A+SPRIDA-B could obviously inhibit the growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721 in a dose dependent manner.It was clear that SPRIDA-B could induce the apoptosis of the cells，when it was used on hepatoma cell SMMC-7721.Conclusion  SPRIDA-B that could obviously inhibit the growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721 and induce the apoptosis of the cells，was an antitumor and antimetastasis drug with remarkable value for study.        【Key words】  SPRIDA-A；SPRIDA-B；hepatoma cell；metastasis；adhesion；apoptosis        苦豆子Sophor  alopecuroides L为豆科槐属植物，在我国西北地区分布广泛。我们从其全草中提取、分离得到生物碱I，并经半合成、纯化制备得SPRIDA-A和SPRIDA-B，SPRIDA-A和SPRIDA-B为同分异构体。SPRIDA-A为人工构型，SPRIDA-B为天然构型。两者由于构型不同，生物活性也可能不同，为了验证其体外抗肿瘤和抗肿瘤转移作用，我们利用SMMC-7721肝癌细胞进行了其体外抗肿瘤及抗转移作用的研究［1～3］。        1  材料与方法        1.1  材料        1.1.1  药物  SPRIDA-A、SPRIDA-B，均为白色固体粉末，引吸湿性强，溶于水，纯度大于95%，由本实验室自制。        1.1.2  主要试剂  RPMI—60培养基、小牛血清、胰蛋白酶、MTT、二甲基亚砜（DMSO）购于中国医学科学院血液学研究所， ECMGEL购自sigma公司。        1.1.3  细胞系  SMMC-7721肝癌细胞株，购于中国医学科学院基础医学研究所。        1.2  方法        1.2.1  细胞培养  SMMC-7721肝癌细胞常规培养于10%小牛血清、100U/ml青霉素及100U/ml链霉素的RPMI—60培养基中，置于37℃ CO2培养箱内培养，2～3d传代1次，以维持细胞处于对数成长期。        1.2.2  SPRIDA-A、SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B对SMMC-7721肝癌细胞生长的影响  采用噻唑氮蓝（MTT）比色分析法。将对数生长期细胞接种于96孔培养板，细胞浓度为8×104/ml，每孔0.2ml，将SPRIDA-A、SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B与细胞共培养24h，加150μl DMSO，全自动酶标仪测定波长490nm光密度（A）值，每孔设6个复孔。试验重复三次，计算各组均值。试验组按下式计算细胞生长抑制率：        生长抑制率（%）=（1-试验组A值/对照组A）×100%        1.2.3  SPRIDA-A、SPRIDA-B对SMMC-7721肝癌细胞粘附功能的影响  采用噻唑氮蓝（MTT）比色分析法。96孔板每孔中分别铺上ECM CEL各50μl，4℃过夜。加入1%BSA150μl/孔，37℃孵箱内孵育2h，倒置沥干。9002与细胞共培养24h，调节细胞浓度为8×104/ml，每孔加0.2ml，吸附1h，用无血清培养液洗2次，加入200μl完全培养液，加MTT 20μl/孔，37℃孵箱内孵育4h，加DMSO150μl/孔。全自动酶标仪测定波长490nm的光密度（A）值，每孔设4个复孔，试验重复二次，计算粘附抑制率：        粘附抑制率（%）=（1-加药组A值/未加药组A值）×100%        1.2.4  SPRIDA-A、SPRIDA-B对SMMC-7721肝癌细胞形态的影响  将对数生长期细胞接种于预先置有盖玻片的6孔培养板内，细胞浓度为8×104/ml，每孔2ml，SPRIDA-A、SPRIDA-B终浓度分别为3.7879×10-4mol/L、1.1364×10-3mol/L、2.2727×10-3mol/L与细胞共培养24h，取出盖玻片，Ciemsa染色后光镜下进行细胞形态学观察［4，5］。        2  试验结果        2.1  SPRIDA-A、SPRIDA-B单用SMMC-7721肝癌细胞的生长抑制作用  见表1。              表1  SPRIDA-A、SPRIDA-B单用SMMC-7721肝癌细胞的生长抑制作用                       由表1可见，SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞生长的抑制作用大于SPRIDA-A。随着SPRIDA-B药物浓度增大，抑制率也明显增加，并呈剂量依赖关系。当药物浓度为1.1364×10-3mol/L时，抑制率可达60%。两组比较，差异有显著性（P<0.05）。        2.2  SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞的生长抑制作用  见表2。            表2  SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B对SMMC-7221 肝癌细胞的生长抑制作用                     由表2可见，SPRIDA-B，SPRIDA-A+SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞的生长均有抑制作用，并呈剂量依赖关系，但在同一剂量条件下相比，SPRIDA-A+SPRIDA-B对 SMMC-7221肝癌细胞的生长抑制作用更加明显，但两组比较，P＞0.05，差异无显著性。        2.3  SPRIDA-A，SPRIDA-B， SPRIDA-A+SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞的生长抑制作用  见表3。             表3  SPRIDA-A，SPRIDA-B，SPRIDA-A+SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞的生长抑制作用                   由表3可见，SPRIDA-A对SMMC-7221肝癌细胞生长抑制作用不明显，而SPRIDA+SPRIDA-B和SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞生长均有明显的抑制作用，并呈剂量依赖关系。当药物浓度为1.1364×10-3mol/L时，抑制率SPRIDA-B为54%，SPRIDA+SPRIDA-B为64%。但组间比较，差异无显著性（P＞0.05）。        2.4  SPRIDA-A、SPRIDA-B对SMM