【摘要】  目的  研究白色念珠菌（Candida Albicans）细胞壁不同溶解性的β-葡聚糖（β-glucan）对环磷酰胺（cyclophosphamide，endoxan，cytoxan，CTX）所致小鼠外周血白细胞减少的回升作用。方法  采用CTX所致的小鼠外周血白细胞减少模型，研究白色念珠菌细胞壁β-葡聚糖对小鼠外周血白细胞数的影响。结果  三种溶解性的白色念珠菌细胞壁β-葡聚糖均能升高小鼠外周血白细胞、中性粒细胞和单核细胞数。各组小鼠脾脏指数增加，脾脏、骨髓巨核细胞系增生。不溶性的β-葡聚糖作用更明显。结论  白色念珠菌β-葡聚糖尤其是不溶性β-葡聚糖对CTX所致的白细胞减少有回升作用，是一种很有前途的免疫调节剂。        【关键词】  白色念珠菌；β-葡聚糖；生物学活性；提取分析；免疫药理作用          【Abstract】  Objective  To study the pharmacological effect of the basic β-glucan，acidic β-glucan and insoluble β-glucan extracts of Candida albicans on the leukocytopoiesis-promoting in the leukopenia mice.Methods  Mice of each group except the untreated control group were administered cyclophosphamide intraperitoneally ［100 mg/(kg·d) for three days］ to develop leucopenia.The experimental group were administered three kinds of Candida albicans β-glucan intravenously for six days separately.The peripherial leukocytes of all mice were counted before treated CTX，and 1，3，5，7 days after treated CTX.Results  Three kinds of Candida albicans β-glucan can increase the numbers of leukocytes，neutrophilic granulocytes and monocytes in the peripheral blood.The spleen index in each group animal are increased，and megakaryocytes are increased in spleen and marrow.Conclusion  Candida albicans β-glucan specially insoluble β-glucans is a kind of immunomodulator which can increase the numbers of leukocytes in the peripheral blood.        【Key words】  β-glucan；Candida albicans；leukocyte；immunomodulator        β-葡聚糖（β-glucan）是白色念珠菌细胞壁中含量最高的多糖。作为一类条件致病真菌多糖，白色念珠菌β-葡聚糖有着多种生物学活性和免疫药理学作用，在抗炎、抗肿瘤、刺激造血等方面都有很高的药效学作用［1］，但有关不同性质的白色念珠菌β-葡聚糖升白细胞作用的研究甚少。本研究制备三种溶解性的β-葡聚糖，观察其对环磷酰胺（cyclophosphamide，endoxan，cytoxan，CTX）所致的小鼠外周血白细胞减少的回升作用，为进一步确证白色念珠菌β-葡聚糖刺激造血系统使白细胞升高的作用机制，和进一步研究白色念珠菌β-葡聚糖有效成分或有效因子，为确立药物质量控制标准和量－效关系提供理论依据。        1  材料与方法        1.1  动物与试剂  昆明种小白鼠，4～6周龄，体重20±2g，昆明医学院动物科（云南省实验质量合格证0000481号）。沙氏液体培养基（Sabouraud’s dextrose agar）：蛋白胨10g、葡萄糖40g、溶于1000ml蒸馏水，高压灭菌后备用；α淀粉酶：分子量～9600，酶活力：50μ/mg（上海伯奥生物科技有限公司）；白色念珠菌碱溶性β-葡聚糖（Candida albicans basic β-glucan， CABBG）、酸溶性β-葡聚糖（Candida albicans acidic β-glucan， CAABG)和不溶性β-葡聚糖（Candida albicans  insoluble β-glucan， CAIBG）：均按文献方法制备［2］。        1.2  仪器  LRH-250Z型震荡培养箱（广东医疗器械厂）；81-2型恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器厂）。        1.3  白念珠菌的培养和三种白色念珠菌β-葡聚糖的制备  取少量保存于密封无菌容器中的纯白色念珠菌菌落，接种于沙氏液体培养基，接种后37℃恒温摇床160次/min震荡培养6～7天，3000rpm离心30min，收集菌体，冷冻保存。提取β葡聚糖的流程，见图1。        1.4  小鼠白细胞减少模型的建立  除空白对照组外，各组小鼠腹腔注射CTX 100mg/(kg·d)，连续3天，建立小鼠外周血白细胞减少模型。        1.5  确定三组β-葡聚糖的给药剂量  参照急性毒性实验摸索LD50值，各组给药剂量最后如表1。        1.6  统计学处理  急性毒性学实验结果采用Bliss法计算LD50值。药效学实验采用SPSS11.5统计软件进行数据处理分析，所有指标均以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用方差分析，以P＜0.05为差异有显著性。  图1  从白色念珠菌提取CABBG、CAABG、CAIBG的流程示意图Table 1  Dose design of experiment      2  结果        2.1  急性毒性学实验  通过急性毒性实验得到LD50值分别为：CABBG 36.8937mg/kg，CAABG 89.23549mg/kg，CAIBG 767.7753mg/kg；95%可信区间分别为CABBG组32.0052～42.5289mg/kg，CAABG组76.7182～103.8025mg/kg，CAIBG组663.748～888.106mg/kg。各实验组小鼠肉眼观察，除肝脏增大外未见明显变化，病理HE切片显示肝细胞有不同程度的肿胀和空泡变。        2.2  外周血白细胞变化  实验第5、7、9天CABBG、CAABG、CAIBG组小鼠外周血白细胞数、中性粒细胞数、单核细胞数均显著增高，其中第7天、第9天，CAIBG组白细胞数、单核细胞数较阳性对照组rhG-CSF升高，差异有显著性。Table 2  Numbers of leukocyte of peripheral blood in each group animal  (x±s) 注：Note：*P＜0.05，compared with the normal control；**P＜0.05，compared with the positive control Table 3  Numbers of neutrophilic granulocyte of peripheral blood in each group animal  (x±s) 注：Note：*P＜0.05，compared with the normal control；**P＜0.05，compared with the positive control Table 4  Numbers of monocyte of peripheral blood in each group animal  (x±s) 注：Note：*P＜0.05，compared with the positive control    2.3  脾脏、胸腺指数变化  实验第5、7、9天，各组小鼠胸腺指数比较，差异无显著性(P＞0.05)。各组小鼠给药后，脾脏指数均增加。 Table 5  The effect of β-glucan on the spleen index in each group animal  (x±s)注：Note：*P＜0.05，compared with the positive control     2.4  药效学实验病理组织学改变  脾脏：白髓、红髓分界不甚清楚，红髓内细胞数增多，与空白对照组比较，CABBG、CAABG、CAIBG组脾窦出现较多